葡萄籽原花青素对DOCA-盐高血压小鼠
心室重构的影响#
汪星辉，黄玲玲，余婷婷，郭言伟，杜苏明，贾媛，高杉**
基金项目：教育部高等学校博士学科点专项科研基金（No 20103420120002）；国家自然科学基金资助项目
（No 81073088）
作者简介：汪星辉，（1987-），男，硕士研究生，主要研究方向：心血管药理学
通信联系人：高杉，（1974-），男，副教授，心血药理学. E-mail: aydgs@126.com
5 （安徽医科大学基础医学院药理教研室，合肥 230032）
摘要：目的：研究葡萄籽原花青素(GSP)对DOCA-盐型高血压小鼠心室重构保护作用并初步
探讨其机制。方法：皮下注射去氧皮质酮（DOCA）同时予高盐饮水形成DOCA-盐型高血压小
鼠模型。实验分为对照组、模型组、和GSP 130mg/kg 组。 计算小鼠心脏重量指数以及肾脏
重量指数，HE 染色和V-G 染色观察心肌病理形态学改变，比色法测定血清中超氧.化物歧化
10 酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量以及心肌羟脯氨酸(Hyp)含量。结果：与空白对照组相比，
DOCA-盐型高血压模型组小鼠心重指数、肾重指数、心肌细胞横截面积（CSA）、心肌胶原纤
维明显升高，血清MDA 含量升高，SOD 活性降低，心肌组织羟脯氨酸含量增加。与模型组相
比，GSP 130mg/kg 组小鼠心重指数、肾重指数、CSA、心肌胶原沉积明显降低，血清MDA 含
量降低，SOD 活性增加，心肌组织Hyp 含量减少。结论：GSP 能明显改善DOCA-高盐高血压
15 小鼠心室重构，其机制可能与抗氧化应激有关。
关键词：心室重构；葡萄籽原花青素；去氧皮质酮；超氧化物歧化酶；丙二醛
中图分类号：R 541; R 977. 1; R 287
 0 引言
高血压作为常见的心血管疾病，其发病率呈逐年上升趋势。高血压的发生和发展实际上
是其靶器官(心脏、肾脏等)的结构和功能损伤的过程。其中心脏是最主要的靶器官，心室重
构是其重要的病理特征，是缺血性心脏病、心律失常、心室舒张功能不全及充血性心力衰竭
50 等心血管事件发生发展的独立危险因素[1]，其微观结构表现为心肌肥大、间质纤维化、血管
周围纤维化以及微小血管病变。高血压心室重构的机制尚未完全阐明。近年来很多研究显示
氧化应激参与心室重构的发生发展[2]。
GSP 是从葡萄籽中提取的多酚类化合物，由不同数量的儿茶素和表儿茶素聚合而成。
许多研究表明，GSP 具有很强的抗氧化特性，是一种较好的氧自由基清除剂，其抗氧化、
55 清除自由基的能力是 Vit E 的50 倍、Vit C 的20 倍[3-4]，此外还具有抗肿瘤、抗衰老、降
血脂和预防心血管疾病等功效。本研究采用经典的DOCA-高盐高血压模型，观察GSP 对高
血压小鼠心室重构的改善作用，并对其抗氧化应激机制进行初步探讨。
1 材料与方法
1.1 动物模型制备与分组
60 普通级雄性昆明小鼠24 只，体重23-26g,由安徽医科大学实验动物中心提供。参照文献
[5-6]复制DOCA-盐型高血压模型小鼠，简述如下。小鼠经1.5%戊巴比妥钠腹腔麻醉，切除
左侧肾脏并结扎肾动脉，腹腔注射青霉素，连续抗感染3d。术后随机分为3 组：单肾对照
组、DOCA-高盐高血压模型组、GSP 用药组（130mg/kg），每组8 只。模型组及用药组皮
下注射DOCA（150mg/kg/周），每周两次，按0.025ml/10g/次给药，同时饮含1%氯化钠及
65 0.2%氯化钾的盐水，持续4 wk。用药组予GSP 130mg/kg，每天灌胃1 次，灌胃给药容积
0.1ml/10g，对照组和模型组给予等容量纯水灌胃。
1.2 观察指标
1.2.1 心脏重量指数、肾脏重量指数测定
小鼠末次给药后禁食不禁水12 h，称体重(BW)，摘眼球取血后脱颈椎处死小鼠，迅速
70 取出心脏和肾脏，剔除心脏和肾脏周围结缔组织，生理盐水洗尽残血，滤纸吸干后称量全心
重(HW)及肾重（KW），并计算全心重指数(HWI=HW／BW)和肾重指数（KWI=KW/BW）。
1.2.2 病理学指标
10％福尔马林溶液固定心肌组织，梯度酒精脱水，常规石蜡包埋，心肌组织 5μm 连续
切片，经HE 染色和Van Gieson(VG)胶原染色，借助Nikon Eclipse 80i 型显微镜观察并采集
75 图片，用形态学图像分析系统测量心肌细胞横截面积（CSA）、心肌纵径宽度、血管胶原(PVCA)
及心肌间质胶原容积分数（CVF）[7]。PVCF=血管周围胶原面积/血管及官腔总面积，CVF=
心肌间质胶原面积/心肌间质总面积。
1.2.3 心肌组织Hyp 含量测定
Hyp 含量测定采用二甲氨基苯甲醛法，严格按照试剂盒说明在550nm 处测定心肌组织
80 Hyp 含量。
 1.2.4 血清MDA 含量和SOD 活性测定
MDA 含量测定采用硫代巴比妥酸法，严格按照试剂盒说明在532 nm 处测定血清中
MDA 含量。SOD 活性测定采用黄嘌呤氧化酶法，严格按照试剂盒说明在550 nm 处测定血
清中SOD 活性。
85 1.3 统计学处理
数值以x±s 表示。组间比较采用方差分析或两独立样本非参数检验。用SPSS10.0 统计
软件进行分析。
2 结果
2.1 GSP 对DOCA-高盐高血压小鼠心脏重量指数、肾脏重量指数的影响
90 皮下注射DOCA 及高盐饮水四周后，与单肾对照组相比，模型组心重指数、肾重指数
明显升高，GSP 可明显抑制心重指数、肾重指数的升高，差异具有统计学意义（P<0.01）。
表明GSP 可改善DOCA-高盐所致的心室重构，减少高血压对肾脏的损伤。（见表1）
表1 GSP对DOCA-高盐高血压小鼠肾脏重量指数、心脏重量指数的影响
组别 BW(g) HW(mg) KW(mg) HWI(mg/g) KWI(mg/g)
单肾对照组
8 25.21±2.98 99.85±16.11 199.71±27.78 3.94±0.19 7.90±0.29
模型组 8 28.18±4.99
154.5±28.88
257.62±37.71
5.49±0.57**
9.18±0.63**
GSP 用药组 7 25.21±3.81 111.86±21.68
208.57±43.21
4.43±0.34##
8.22±0.46##
95 与单肾对照组比较，**P<0.01;与模型组比较，##P<0.01
2.2 GSP 对DOCA-高盐高血压小鼠心肌细胞横截面积和纵径宽度的影响
与单肾对照组相比，高血压模型组心肌细胞横截面积及纵径宽度明显增加，差异有统计
学意义（P<0.01）。与模型组相比，GSP 用药组心肌细胞横截面积和纵径宽度减小，差异有
100 统计学意义（P<0.01），见图1。
 C
0
50
100
150
200
250
1 2 3
心肌细胞横截面积
#
**
#
D
0
4
8
12
16
20
1 2 3
心肌纵径宽度
**
##
110
图1 GSP对DOCA-高盐高血压小鼠心肌细胞横截面积和纵径宽度的影响（x±s, n=7-8）
A: 心肌细胞横截面积代表图(HE×400); B: 心肌细胞纵径宽度代表图(HE×400); C:心肌细胞横截面积统计结
果；D:心肌细胞纵径宽度统计结果；1：单肾对照组；2：DOCA-盐高血压模型组；3：GSP130mg/kg. 与单
肾对照组比较,. **P<0.01;与模型组比较，##P<0.01
115
2.3 GSP 对DOCA-高盐高血压小鼠心肌组织胶原纤维含量的影响
VG 染色后，心肌组织呈黄色，胶原纤维呈红色。与单肾对照组相比，模型组心肌胶原
纤维明显增多，心肌CVF 和PVCA 增加，差异具有统计学意义。与模型组相比，GSP 用药
组心肌胶原纤维明显减轻，心肌CVF 和PVCA 降低，差异有统计学意义（P<0.01）见图2。
 B
130
C
0
2
4
6
8
10
12
1 2 3
组别
PVCA
**
##
D
0
2
4
6
8
10
12
1 2 3
组别
CVF
**
##
135 图2 GSP对DOCA-高盐高血压小鼠心肌组织胶原纤维含量的影响（x±s，n=7~8）
A. 心肌血管周围胶原VG染色代表图(×400); B.心肌间质胶原VG染色代表图(×400); C. 心肌血管周围胶原
容积分数(PVCA)；D.心肌间质胶原容积分数(CVF). 1:单肾对照组. 2: DOCA-盐型高血压模型组; 3: GSP 130
mg/kg 组; 与单肾对照组比较: **P<0.01; 与模型组组比较: ##P <0.01
140 2.4 GSP 对心肌组织Hyp 含量的影响
皮下注射DOCA 及高盐饮水四周后，模型组心肌组织Hyp 含量较对照组明显增加，差
异具有统计学意义（P<0.01）。与模型组相比，GSP 用药组心肌组织Hyp 含量明显减少，
差异具有统计学意义(P<0.05，P<0.01)，见图3。
 0
0.02
0.04
0.06
0.08
0.1
1 2 3
心肌组织Hyp含量(μm)
*
#
*
图145 3 GSP对心肌组织Hyp含量的影响（x±s，n=7~8）
1:单肾对照组；2：DOCA-盐型高血压模型组；3：GSP130mg/kg组； 与单肾对照组比较，**P<0.01;与模型
组比较，#P<0.05.
2.5 GSP 对血清MDA 含量和SOD 活性的影响
150 与单肾对照组相比，高血压模型组血清MDA 含量明显增加，血清SOD 活性明显降低。
经GSP 连续四周灌胃给药后，用药组较模型组血清MDA 含量明显减少，血清SOD 活性明
显升高，表明GSP 具有一定的抗氧化应激损伤的药理作用(见表2)。
表2 GSP对血清MDA含量及SOD活性的影响（x±s，n=7~8）
组别 n MDA(nmol/ml) SOD(U/ml)
单肾对照组 8 5.22±1.21 1.15±0.086
模型组 8 6.97±0.79** 0.93±0.12**
GSP 用药组 7 5.43±0.69## 1.07±0.07#
155 与单肾对照组比较，**P<0.01;与模型组比较，##P<0.01，#P<0.05
3 讨论
DOCA - 盐诱导的高血压模型(DHR) 是一种继发性高血压模型,与人类高血压中的原发
性醛固酮增多症相似。DOCA 作为醛固酮的前体，与醛固酮有相似的生理作用：保钠排钾，
160 促进Na+的重吸收，长期或过量应用将导致水钠潴留、血容量增大、肾素-血管紧张素系统
的活性受到抑制，血浆肾素活性低下，加剧肾脏损伤，形成高血压[8]。本实验研究结果显示，
与单肾对照组相比，DOCA-盐型高血压模型组小鼠肾脏重量指数、心脏重量指数、心肌细
胞横截面积明显增加，且差异具有统计学意义，说明高血压模型制备成功。
GSP 作为自然界广泛存在的多酚类化合物，其对心血管系统的活性已逐渐被人们认识。
165 既往研究显示GSP 可通过其强大的抗氧化、抗炎、降低动脉血压以及降低动脉粥样硬化风
险指数、改善脂质特性等药理学效应而发挥心肌保护作用[9]。本研究结果显示，与模型组相
比，GSP 组心肌细胞横截面积、心肌纵径宽度、心肌间质CVF、血管周PVCF 及心肌Hyp
含量均明显减小，说明GSP 可改善心肌间质及心肌血管周纤维化，抑制心室重构的发生和
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