野黄芩苷对缺氧缺糖损伤神经元的保护作用及机制研究#
 

摘要：目的：考察灯盏细辛中野黄芩苷对缺氧缺糖（oxygen glucose deprivation ,OGD）损伤神经元的保护作用和机制。方法：体外培养大鼠大脑皮层神经元，建立缺氧缺糖损伤模型，野黄芩苷（Scutellarinon，Scu）进行干预后，高效液相色谱法检测谷氨酸的释放、酶标仪检测钙离子浓度及线粒体膜电位的变化。结果：缺氧缺糖培养条件下，与对照组比较，模型组中谷氨酸、钙离子释放量均明显升高（p＜0.01），与模型组比较，Scu 12.5﹑25、50μg/ml 组均不同程度降低了谷氨酸和钙离子（Ca2+）的释放量；与对照组比较，模型组中线粒体膜电位明显降低（p＜0.01），与模型组比较，Scu 25、50、100μg/ml 组均不同程度的使线粒体膜电位升高。结论：野黄芩苷能抑制缺氧缺糖损伤神经元谷氨酸释放、抑制细胞内钙超载、升高线粒体膜电位等，对缺氧缺糖损伤的神经元有保护作用。
 

关键词：野黄芩苷；神经元；缺氧缺糖损伤；脑保护作用

0 引言
脑血管疾病是危害人类生命与健康的常见病和多发病 ，是人类三大死亡原因之一。缺血性脑损伤的病理过程极为复杂，其发病机制涉及脑组织能量代谢紊乱、兴奋性氨基酸毒性、自由基损伤、炎症反应等多环节。野黄芩苷是从灯盏细辛中提取出来的黄酮类成分，研究表明，野黄芩苷具有扩张血管、减少血小板计数和抑制血小板凝集等作用[1]，临床主要用于脑梗死、中风后偏瘫、冠心病心绞痛及防治急性心肌梗死再灌注损伤等[2]。原代培养神经元(oxygen-glucosedeprivation,OGD)模型已被广泛用于研究离体水平脑缺血损伤,这一模型能够模拟整体水平脑缺血损伤,是离体水平评价药物神经保护作用的有效手段[3-4]。本研究原代培养大鼠大脑皮层神经元，以缺氧缺糖（oxygen glucose deprivation ,OGD）损伤为模型，旨在考察野黄芩苷对损伤神经元的保护作用，初步探讨野黄芩苷抗脑缺血损伤机制，为临床用药提供实验依据。

4 结论
本文给出了野黄芩苷对缺氧缺糖损伤神经元具有一定保护作用，其机制可能与抑制谷氨酸释放、降低细胞内钙离子浓度以及升高线粒体膜电位相关。缺氧缺糖是研究中枢神经系统缺氧缺血性损伤的成熟模型[5]。脑缺血后，兴奋性氨基酸（如谷氨酸）含量显着增加，激活NMDA 受体。NMDA 受体过度刺激和提高，直接开放离子通道，影响钙稳态机制[6]。此外，当细胞活动导致大量或过度细胞升高时，线粒体内可能蓄积大量的钙，促进线粒体通透性转换孔开放，释放细胞色素C 和凋亡诱导因子，导致细胞凋亡。细胞内产生的活性氧还可以破坏线粒体功能，从而影响细胞活性。因此，抑制谷氨酸的释放、降低细胞内游离钙浓度、减少活性氧生成、增加线粒体膜电位等对神经元均有保护作用。
 

细胞内钙超载是缺血性中风的主要病理因素之一，有研究表明，缺氧几分钟，即可引起神经细胞内[Ca2+]i 显着增加[7]。本研究证实野黄芩苷具有较好的钙离子拮抗作用，但其具体机制是通过抑制细胞外Ca2+内流，还是阻止细胞内钙释放，抑或两者兼有，还有待于进一步研究。谷氨酸是中枢神经系统主要的兴奋性神经递质，是神经细胞之间的通信方式，本研究证实野黄芩苷能明显抑制缺氧缺糖引起的谷氨酸释放增加。线粒体膜电位反映线粒体的功能状态，线粒体膜通道的开放，导致线粒体通透性的改变[8]，这种改变是内源性线粒体凋亡途径中细胞内的起始性事件，野黄芩苷可通过升高线粒体膜电位，抑制相关凋亡途径的激活。
 

[参考文献] (References)
[1] 石森林,张韩清,储利胜,等.灯盏乙素不同途径给药对大鼠实验性脑缺血防治作用的比较研究[J].中草药,2009,40(2):274.
[2] 万丽丽,郭澄.野黄芩苷药动学研究进展[J].中国药房,2007,18（30）:2835
[3] LEGOS J J,MCLAUGHLIN B A, SKAPER S D, et a.lThe selective p38 inhibitorSB-239063 protects primary
neurons from mild to moderate excitotoxic injury[J].Eur J Pharmaco,l 2002,447(l):37-42.
[4] MELONI B P,MAJDA B T, KNUCKEY N W. Establishment ofneuronalin vitromodels of ischemia in
96-wellmicrotiter strip-plates that result in acute,progressive and delayed neuronal death[J].
Neuroscience,2001,108(1):17-26
[5] Seigo Tanaka,Masanori Takehashi,Shinya Iida,Takashi Kitajima,Yoshihisa Kamanaka,Todd Stedeford,Marek
Banasik,Kunihiro Ueda.Mitochondrial impairment induced by poly (ADP-ribose) polymerase-1 activation in cortical neurons after oxygen and glucose deprivation[J].Journal of Neurochemistry,2005,95:179-190
[6] Jung HH,Lee JJ,Washington JM,Zuo Z.Inability of volatile anesthetics to inhibit oxygen-glucose
deprivation-induced glutamate release via glutamate transporters and anion channels in rat corticostriatal
slices,Brain Res. 2008,28:234-239
[7] Meng F,To WK,Gu Y.Role of TRP channels and NCX in mediating hypoxia-induced [Ca2+]elevation in PC12 cells[J].Respir Physiol Neurobiol 2008,164:86-393
[8] 庞鹏,朱陵群,张文生等.丹参素对缺氧/缺糖损伤的神经细胞线粒体膜电位和凋亡的影响[J].中华中医药杂志,2006,21(6):330