罗布麻原麻黄酮类成分的分析#
王慧娟1，陈颢2，张元明1，李明华1**
基金项目：国家自然基金（50573035）
作者简介：王慧娟（1984-），女，硕士研究生，纺织材料与纺织品设计
通信联系人：张元明（1979 年-），男，研究员，纺织材料结构与性能研究，纺织新材料、新工艺研究与产
品开发. E-mail: zhangyuanming001@163.com
（1. 青岛大学纤维新材料与现代纺织实验室，山东青岛 266071；
5 2. 国家海洋局第一海洋研究所生态中心，青岛 266061）
摘要：目的：分析罗布麻原麻以及原麻乙酸乙酯与正丁醇部位中黄酮类化合物的含量。方法：
采用HPLC 法，以色谱柱：Kromasil 100-5 C18（250*4.6mm）；柱温：设定25℃（上限70℃）；
流动相：乙腈/水（0.1%三氟乙酸）；梯度洗脱：0-40min,乙腈10%；40-50min 乙腈100%；
流速：0.5mL/min；检测波长：270nm；进样量：10μL。结果：所得线性方程和相关系数r
10 分别为:槲皮素Y=3.0E-5X+2.6419,r=0.9997，槲皮素浓度在4.24μg/mL~65.63μg/mL 之间与峰
面积线性关系良好； 金丝桃苷Y=6.2E-5X-3.9276 ， r=0.9997 ， 金丝桃苷浓度在
3.97μg/mL~62.05μg/mL 之间与峰面积线性关系良好。结论：金丝桃苷是罗布麻中一种主要
的黄酮类化合物，含量远大于槲皮素；
关键词：纺织材料；罗布麻原麻；罗布麻精干麻；黄酮类；HPLC
15 中图分类号：N34
Analysis of Flavonoids in Apocynum Venetum
Wang Huijuan1, Chen Hao2, Zhang Yuanming1, Li Minghua1
(1. Laboratory of Fiber Materials and Modern Textile,Qingdao University,Qingdao 266071;
20 2. First Institute of Oceanography,Qingdao 266061)
Abstract: Flavonoids content in Apocynum Venetum and its acetic ether and n-butanol portion
were analyzed by HPLC assay. The samples were analyzed on a Kromasil C18 (250*4.6mm)
column, with acetonitrile-water-0.1%TFA(trifluoroacetic acid) as mobile phase consisting, and
detected at 270 nm. The column temperature was set in 25℃ and flow rate was 0.5mL/min. The
25 UV peak areas were used for quantitation of Quercetin and Hyperoside content.The correlation
coefficient (r) of the calibrations were both 0.9997 over the range of 4.24μg/mL~65.63μg/mL and
3.97μg/mL~62.05 μg/mL. The Hyperoside content is far higher than the Quercetin content as a
main flavonoids in Apocynum Venetum.
Key words: textile material; Apocynum Venetum; Apocynum Venetum fiber; Flavonoids; HPLC
30
0 引言
罗布麻属夹竹桃科茶叶花属作物，具有耐旱、耐盐碱、抗风、耐冬季严寒和夏季酷热的
优良特性[1,2,3]。麻纤维除具有优异的纺织服用性能外，而且自古以来被认为具有抗菌防霉的
作用[4,5,6]。罗布麻纤维在已发现的野生纤维植物中，品质最优，是纺织和造纸的优良原料。
35 罗布麻作为一种新型的纺织纤维，除其优良的纺织性能外，其抗菌抑菌活性[7,8,9]一直是一个
热点。黄酮类物质属于生理活性物质，虽然他们不是维生素，但是在生物体内具有多种有益
功能：具有降低血压、防止动脉硬化和抗衰老以及增强机体免疫力等功能，现有的研究报道
表明大花罗布麻叶中具有多种且含量较高的黄酮类活性成分[10,11,12]。为研究罗布麻原麻中黄
酮类活性成分，本文拟采用HPLC 法对罗布麻原麻及其乙酸乙酯与正丁醇部位中槲皮素和金
 40 丝桃苷进行定量研究，这对罗布麻原麻浸膏的进一步分离与纯化以及罗布麻制品的抗菌防臭
机理诠释具有一定的指导意义。
1 仪器与试剂
L-2000型高效液相色谱仪(HPLC)（日本日立公司），包括：四元泵（Pump，L-2130），
进样器，柱温箱（Column Oven，L-2300），DAD检测器（Diode Array Detector，L-2455）；
45 电子天平，FA2104型，上海精科天平。
槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所提供）；金丝桃苷对照品(西格玛奥德里奇贸易
有限公司）；
纯净水（娃哈哈纯净水）；乙腈（国药集团化学试剂有限公司，HPLC级）；甲醇（国药
集团化学试剂有限公司，色谱纯）；三氟乙酸（国药集团化学试剂有限公司）；
50 罗布麻原麻产地为新疆，由青岛大学国家重点实验室培育基地，纤维新材料与现代纺织
实验室提供；实验采用的供试品是经过浸提的罗布麻原麻浸膏和经过乙酸乙酯和正丁醇萃取
的浸膏。
2 仪器与试剂
2.1 色谱条件
55 色谱柱：Kromasil 100-5 C18（250*4.6mm）；柱温：设定25℃（上限70℃）；流动相：乙
腈/水（0.1%三氟乙酸）；梯度洗脱：0-40min,乙腈10%；40-50min乙腈100%；流速：0.5ml/min；
检测波长：270nm；进样量：10μL。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取槲皮素对照品2.11mg，金丝桃苷对照品4.02mg，分别置于量瓶中，加甲醇溶解
60 稀释定容制成四种对照品溶液，浓度分别为槲皮素0.525mg/mL、金丝桃苷0.501mg/mL。精
密吸取各对照品溶液经过稀释分别制成五种不同浓度的溶液。槲皮素对照品溶液浓度依次
为：65.63μg/mL、26.25μg/mL、14.03μg/mL、6.56μg/mL、4.24μg/mL；金丝桃苷对照品溶液
浓度依次为：62.05μg/mL、30.36μg/mL、14.14μg/mL、8.02μg/mL、3.97μg/mL[13,14,15,16,17]。
2.3 供试品溶液的制备
65 供试品分别为：罗布麻原麻浸膏、罗布麻原麻乙酸乙酯萃取部位浸膏、罗布麻原麻正丁
醇萃取部位浸膏。
精密称取以上供试品置于具盖锥形瓶中，加甲醇将其置于超声波中水浴加热促其溶解，
制成浓度分别为63.467mg/mL、16.2mg/mL、12.467mg/mL。分别取一定量溶液经0.22μm 微
孔滤膜过滤后保存备用。
70 2.4 标准曲线的建立
精密吸取以上对照品溶液10μL，进样做HPLC 分析。以对照品的浓度（Y）对相对应
 的峰面积（X）进行线性回归，得线性方程和相关系数r 分别为: 槲皮素Y=3.0E-5X+2.6419,
r=0.9997，实验表明槲皮素浓度在4.24μg/mL~65.63μg/mL 之间与峰面积线性关系良好；金
丝桃苷Y=6.2E-5X-3.9276，r=0.9997，实验表明金丝桃苷浓度在3.97μg/mL~62.05μg/mL 之
75 间与峰面积线性关系良好。
2.5 样品测定
精密吸取六种供试品10μL，进样做HPLC 分析测定。据相应线性关系计算样品含量。
结果如表1。
表1 六种供试品中黄酮类物质含量测定结果
80 Tab. 1 Flavonoids content in six samples
黄酮类物质含量(%) 罗布麻原麻罗布麻原麻乙酸乙酯萃取罗布麻原麻正丁醇萃取
槲皮素 0.021 0.088 0.025
金丝桃苷 0.136 0.468 0.362
对照品槲皮素与金丝桃苷的HPLC 色谱图如下图1（A、B），其保留时间分别是23.52min
与16.95min。图1（C、D、E）分别为罗布麻原麻、罗布麻原麻乙酸乙酯萃取部位和正丁醇
萃取部位的色谱图，图中标示的峰分别代表槲皮素与金丝桃苷。
 图1 对照品：A(槲皮素)、B(金丝桃苷)；样品：C(罗布麻原麻)、D(l 罗布麻原麻乙酸乙酯部位)、E(罗布麻
原麻正丁醇部位) HPLC 色谱图
95 Fig. 1 Reference Substance:A(Quercetin), B(Hyperoside ); Sample: C(Apocynum Venetum), D(acetic ether
portion of Apocynum Venetum), E(n-butanol portion of Apocynum Venetum) HPLC Chromatogram
自以上表格数据与色谱图中可以看出，金丝桃苷在三种样品中含量较槲皮素高很多；金
丝桃苷和槲皮素的含量都在经过乙酸乙酯萃取后有所增高，金丝桃苷在经正丁醇萃取后含量
100 也有所增加，而槲皮素在经过正丁醇萃取后含量几乎没有变化。
3 结论
最终测得金丝桃苷在罗布麻原麻以及两种萃取物中的含量远高于槲皮素含量，槲皮素在
罗布麻原麻乙酸乙酯部位的含量要高于其他部位，甚至高于未经萃取的罗布麻原麻提取物。
经过实验所得数据，槲皮素的含量在罗布麻原麻浸膏经乙酸乙酯萃取后增高，在进一步
105 的分离提纯中，对于槲皮素的提取可以重点选用乙酸乙酯部位；对于金丝桃苷的提纯，可以
选用乙酸乙酯或者正丁醇萃取去除部分杂质。从几种样品的色谱图中所示信息，本文所选的
流动相可为进一步的分离提纯黄酮类化合物做一定的参考。本实验可为进一步分析和研究罗
布麻抗菌抑菌活性打下基础。