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100.00±14.97 65.87±20.11★ 80.63±14.81★＃ 75.68±16.83★ 100.00±13.63 71.96±11.48★ 85.54±18.08★＃● 75.13±14.65★ 99.95±12.23 80.64±36.12★ 91.93±12.90＃● 83.26±18.95★ 注：★表示显著低于此时间点空白对照组（P<0.05），＃表示显著高于此时间点UVA 组（P<0.05）， ●表示显著高于此时间点UVA+0.1 mmol/L 组（P<0.05）。 130 表3 各组不同时间点上清液中IL-1α 蛋白水平（ x ±s ,n=3,pg/ml） Tab.3 The level of IL-1α at different time point after 10J/cm2UVA irradiation（ x ±s ,n=3,pg/ml） 6h 24h 48h 72h 空白组 UVA 组 UVA+0.01mmol/L 白藜芦醇组 UVA+0.1mmol/L 白藜芦醇组 48.51±6.20 58.39±0.67★ 36.63±4.28＃▲■(1) 54.80±3.94 63.34±5.08 60.13±3.08 50.99±4.36＃▲ 55.16±6.31 50.07±3.91 51.77±1.77 43.89±3.60＃▲ 49.69±3.95 54.61±3.09 49.85±5.73 47.63±2.39 50.59±3.66 注：★表示显著高于此时间点空白对照组（P<0.05），＃表示显著低于此时间点空白对照组（P<0.05）， ▲表示显著低于此时间点UVA 组（P<0.05），■表示显著低于此时间点UVA+0.1 mmol/L 组（P<0.05）。 (1)表示显著低于组内24h、72h 水平（P<0.05）。 135 表4 各组不同时间点上清液中IL-1β 蛋白水平（ x ±s ,n=3,pg/L） Tab.4 The level of IL-1β at different time point after 10J/cm2UVA irradiation（ x ±s ,n=3,pg/L） 6h 24h 48h 72h 空白组 UVA 组 UVA+0.01mmol/L 白藜芦醇组 UVA+0.1mmol/L 白藜芦醇组 1023.25±86.40 1294.37±92.51★ 664.63±135.77＃▲■(1) 1297.35±82.05★ 1058.45±37.30 1270.98±60.22★ 1144.10±24.18▲ 1217.76±72.45★ 1109.66±48.13 1311.25±73.17★ 1152.69±87.49▲ 1229.84±19.00★ 1045.55±48.18 1236.76±56.49★ 1110.12±51.91▲ 1189.04±74.51★ 注：★表示显著高于此时间点空白对照组（P<0.05），＃表示显著低于此时间点空白对照组（P<0.05）， ▲表示显著低于此时间点UVA 组（P<0.05），■表示显著低于UVA+0.1 mmol/L 组（P<0.05）。 140 (1)表示显著低于组内24h、48h、72h 水平（P<0.05）。 表5 各组不同时间点上清液中IL-6 蛋白水平（ x ±s ,n=3,pg/ml） Tab.5 The level of IL-6 at different time point after 10J/cm2UVA irradiation（ x ±s ,n=3,pg/ml） 6h 24h 48h 72h 空白组 UVA 组 UVA+0.01mmol/L 白藜芦醇组 UVA+0.1mmol/L 白藜芦醇组 160.45±7.19 197.81±6.37★ 134.21±5.56＃▲■(1) 160.59±2.76▲ 196.01±5.39 240.62±1.42★ 183.16±5.66＃▲ 182.90±6.67▲ 190.13±4.01 212.15±4.37★ 199.72±5.56▲ 203.49±4.66 195.09±1.78 215.65±3.78★ 201.94±4.71▲ 206.26±2.51 注：★表示显著高于此时间点空白对照组（P<0.05），＃表示显著低于此时间点空白对照组（P<0.05）， ▲表示显著低于此时间点UVA 组（P<0.05），■145 表示显著低于此时间点UVA+0.1 mmol/L 组（P<0.05）。 (1)表示显著低于组内24h、48h、72h 水平（P<0.05）。 3 结论 白藜芦醇是植物界分布较广的一类羟基二苯乙烯类化合物。我们前期实验室研究表明， 白藜芦醇联合抗氧化剂可以有效防护模拟日光照射（solar simulator ultraviolet irradiation, 150 ssUVR）引起的皮肤黑素颗粒增加、朗格汉斯细胞数量减少[5]，临床试验证实白藜芦醇可有 效减轻ssUVR 引起的红斑和变黑反应[4]，但具体机制尚不清楚。 UVA 可诱导成纤维细胞分泌IL-1、IL-6 [6,7,8]。IL-1 活化JNK，上调c-Jun mRNA 的表达， 从而促进基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMP）-1、3、9 的产生[9,10]；IL-6 具 有致炎和免疫调节作用，能够显著增加MMP-1、3 的产生[9]。MMPs 是一大类具有特定结构 155 的锌依赖性内源性蛋白酶家族，其中MMP-1 降解Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维，MMP-3 降解基底 膜中的Ⅳ型及其他类型胶原纤维，MMP-9 进一步降解MMP-1 作用胶原后所产生的胶原蛋 白片段，在这些MMPs 的共同作用下，MMPs 几乎特异性降解所有的细胞外基质成分，进 而引起皮肤光老化[11]。 本实验以10J/cm2UVA 辐射体外培养的成纤维细胞做为研究对象，在辐射后即刻加入白 160 藜芦醇，探讨白藜芦醇对UVA 辐射人体成纤维细胞的光防护作用机制。研究初期结果显示 高浓度（0.5mmol/L 和1.0mmol/L）白藜芦醇对正常细胞的增殖活性有显著的抑制作用，且 抑制程度与干预时间成正比，较低浓度（0.01mmol/L 和0.1mmol/L）白藜芦醇对正常细胞增 殖活性无明显影响，因此我们采用0.01mmol/L 和0.1mmol/L 白藜芦醇对10J/cm2UVA 辐射 后的成纤维细胞进行干预。研究结果显示0.01mmol/L 白藜芦醇对UVA 辐射后各时间点的 165 细胞增殖活性有显著保护作用，而0.1mmol/L 白藜芦醇则无此保护作用。进一步测定细胞培 养上清液炎性因子的分泌水平发现， 0.01mmol/L 白藜芦醇对UVA 辐射的成纤维细胞分泌 的IL-1α、IL-1β、IL-6 均有明显抑制作用，以6h 时抑制作用最强。而0.1mmol/L 白藜芦醇 仅对IL-6 蛋白（6h、24 h）有明显抑制作用，且这种作用低于0.01mmol/L 白藜芦醇处理组； 对IL-1α、IL-1β 则无影响。 170 我们的研究结果提示并非所有浓度的白藜芦醇均对培养的人成纤维细胞具有保护作用。 0.5mmol/L 和1.0mmol/L 的白藜芦醇对即使无UVA 辐射的细胞增殖活性亦有明显的抑制作 用，考虑药物浓度大对细胞产生毒性作用；0.1mmol/L 的白藜芦醇虽对细胞增殖无抑制作用， 但亦无保护作用，对于细胞炎性因子分泌在大多数情况下也是无抑制作用的。只有 0.01mmol/L 白藜芦醇可有效抑制经10J/cm2UVA 辐射诱导的成纤维细胞增殖活性的下降及 175 炎性细胞因子分泌。 综上，白藜芦醇对UVA 辐射人体成纤维细胞的光防护作用机制与细胞增殖活性及细胞 因子IL-1α、IL-1β、IL-6 密切相关，最佳作用浓度为0.01 mmol/L，在此浓度下白藜芦醇光 防护作用起效时间早、稳定、持续时间长。 180 [参考文献] (References) [1] Boscolo P, del Signore A, Sabbioni E, et al. Effects of resveratrol on lymphocyte proliferation and cytokine release[J]. Ann Clin Lab Sci, 2003, 33(2): 226-231. [2] Ahmad N, Adhami VM, Afaq F, et al. Resveratrol causes WAF-1/p21-mediated G(1)-phase arrest of cell cycle and induction of apoptosis in human epidermoid carcinoma A431 cells[J]. Clin Cancer Res, 2001, 7(5): 1466-1473. 185 [3] Shin SM, Cho IJ, Kim SG. Resveratrol protects mitochondria against oxidative stress through AMP-activated protein kinase-mediated glycogen synthase kinase-3beta inhibition downstream of poly(ADP-ribose)polymerase-LKB1 pathway[J]. Mol Pharmacol, 2009, 76(4): 884-895. [4] 贾丽丽, 李远宏, 吴严, 等. 白藜芦醇对模拟日光照射所致皮肤损伤的防护作用[J]. 中国美容医学, 2010, 19(9): 1306-1308. 190 [5] 贾丽丽, 李远宏, 吴严, 等. 白藜芦醇对模拟日光照射后黑素和朗格汉斯细胞的影响[J]. 中国美容医学, 2012, 19(7): 999-1002. [6] Xu YR, Fisher GJ. Ultraviolet (UV) light irradiation induced signal transduction in skin photoaging[J]. J Dermatol Sci, 2005, S1-S8. [7] Wlaschek M, Heinen G, Poswig A, et al. 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